心力衰竭蒙医寒证热证模型的建立及评价

目的：研究心力衰竭（简称心衰）蒙医寒证、热证模型的建立方法及其评价。方法：将68只（雌雄各半）Wistar大鼠随机分为正常对照组（CON）8只,阿霉素心衰模型组（ADR）12只,阿霉素+冰水心衰寒证模型组（ADR+IW）12只,阿霉素+阿魏、肉桂心衰热证模型组（ADR+MY）12只,冰水心衰寒证模型组（IW）12只,阿魏、肉桂心衰热证模型组（MY）12只等6组。ADR组给于腹腔注射盐酸阿霉素针剂;ADR+IW组给予腹腔注射盐酸阿霉素针剂同时,冰水（0℃）灌胃建立心衰寒证模型,ADR+MY组予腹腔注射盐酸阿霉素针剂同时,阿魏+肉桂灌胃建立心衰热证模型,IW组给予冰水（0℃）灌胃建立心衰寒证模型, MY组予阿魏+肉桂灌胃建立心衰热证模型,CON组给予等量生理盐水灌胃,干预6周后做心脏彩超、取材。将心肌组织做苏木精-伊红（HE）染色 、检测血清N末端B型利钠肽前体（NT-proBNP）及心肌酶变化,检测心肌组织钠、钾-三磷酸腺苷酶（Na+-K+-ATP）,钙-三磷酸腺苷酶（Ca2+-ATP）活性及琥珀酸脱氢酶（SDH）活性。结果：与CON组比较,5种模型组大鼠体重均显著下降（P<0.01）;与ADR+IW组比较,ADR和ADR+MY组大鼠体重均显著下降（P<0.05）、MY组大鼠体重下降,但无明显差异（P>0.05）;与ADR+MY比较,ADR+IW和IW组大鼠体重均显著增高（P<0.05,P<0.01）;与IW比较,ADR组大鼠体重显著下降（P<0.01）、MY组大鼠体重下降,但无显著差异（P>0.05）。与CON组比较,ADR+IW和IW组大鼠体温显著下降（P<0.01）;ADR+MY和MY组大鼠体温显著升高（P<0.01）;与ADR+IW比较,ADR、ADR+MY及MY组大鼠体温显著升高（P<0.01）,与ADR+MY比较,ADR、ADR+IW及IW组大鼠体温显著下降（P<0.01）;与IW比较,ADR和MY组大鼠体温显著升高（P<0.01）。与CON组比较,5个模型组血清NT-proBNP明显升高（P<0.05,P<0.01）;与CON组比较,5个模型组心肌酶各项指标出现不同程度升高;与CON组比较,5个模型组心脏彩超EF%、FS%显著降低（P<0.01）,而LVIDs值显著升高（P<0.01）,且ADR、ADR+IW及ADR+MY组各值降达到心衰水平。心肌组织HE染色结果示,各模型组大鼠心肌细胞出现不同程度病理变化,其中ADR+IW、ADR+MY大鼠组心肌细胞排列紊乱、丧失正常细胞结构、炎性细胞浸润,出现心肌纤维化,而病变程度依次为： ADR+IW>ADR>ADR+MY,IW和 MY组大鼠只出现心肌细胞排列紊乱。与CON组比较,ADR+MY和MY组大鼠心肌组织Ca2+-ATP和SDH等酶活性均显著升高（P<0.01）,而ADR+IW和IW组的显著下降（P<0.01）;与CON组比较,ADR+MY组大鼠心肌组织Na+-K+-ATP酶活性显著升高（P<0.01）,而ADR+IW和IW组的显著下降（P<0.01）、MY组的无显著差异（P>0.05）;与ADR+IW比较,ADR、ADR+MY和MY组心肌细胞Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP及SDH等酶活性显著升高（P<0.01）;与ADR+MY比较,ADR 、ADR+IW及IW组大鼠心肌细胞Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP及SDH等酶活性显著降低（P<0.01）,与IW组比较,MY组ATP和SDH酶活性明显降低（P<0.01）。结论：注射盐酸阿霉素的同时给予冰水和阿魏+肉桂能成功建立心衰寒证和热证模型,模型成功模拟心衰寒证、心衰热证的临床症状及病理组织学变化。采取该方法建立的心衰寒证和心衰热证动物模型可行,为本病症的研究提供了准确、客观、有效的动物模型的建立及评价方法。     

内热针联合云克疗法治疗膝关节骨性关节炎的疗效及其对患者IL-1和TNF-a水平的影响

目的:观察内热针联合云克疗法治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效,以及检查其对患者白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子-a(TNF-a)水平的影响。方法:选取2012年6月至2013年3月武汉市普仁医院收治的膝关节骨性关节炎患者70例,随机分为观察组和对照组,每组35例,观察组患者给予内热针联合云克疗法治疗,对照组患者仅给予云克疗法治疗,疗程为6周。分别测定治疗前和治疗后不同时期2组患者的IL-1和TNF-a水平。并观察2组治疗前和治疗后不同时期膝关节HSS评分。结果:治疗后,2组患者各个时期的IL-1和TNF-a水平较治疗前明显下降(P0.05);且观察组的IL-1和TNF-a水平较对照组的显著下降,差异有统计学意义(P0.05);治疗后观察组各个时期的膝关节HSS评分明显高于对照组(P0.05)。结论:内热针联合云克疗法对治疗膝关节骨性关节炎有着明显的疗效,其机制可能是通过有效地降低抑制膝关节骨性关节炎患者的IL-1和TNF-a水平来减轻炎性反应,从而减缓膝关节的退化,值得临床作进一步推广。     

基于数据挖掘探讨吴寿善治疗慢性乙型病毒性肝炎用药规律

目的：基于中医医疗与临床科研信息共享系统,运用数据挖掘技术探讨湖北中医大师吴寿善教授 中医药治疗慢性乙型病毒性肝炎的用药规律。方法：应用结构化电子病历采集767例吴寿善接诊慢性乙型病 毒性肝炎门诊患者的临床资料,通过数据集成、汇交、整合后,利用数据分类、关联、聚类规则方法对临床资料进 行分析。结果：①确定259个处方中药物的使用频次前五位药物分别是茯苓、茵陈、陈皮、丹参、连翘;②药物配 伍方面,关联度最高的配对分别为茯苓-甘草-白术、茯苓-丹参-白术、茵陈-茯苓-甘草等;③挖掘核心处方时, 发现蒿芩清胆汤、大安丸、半夏白术天麻汤等经典方加减使用频次最高。结论：通过数据挖掘方法,我们发现吴 寿善教授以中医药治疗慢性乙型病毒性肝炎在治则治法上,主要从毒痰瘀虚进行辨证施治。     

HSP22在高脂致动脉粥样硬化病变中的作用及对他汀干预的影响

目的:研究热休克蛋白22(heat shock protein 22,HSP22)在高脂饮食诱导的小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病变中的作用,及其对阿托伐他汀(atorvastatin,Ator)干预的影响。方法:8~9周龄Apo E~(-/-)和HSP22~(-/-)Apo E~(-/-)和HSP22+Apo E~(-/-)雄性小鼠各18只,每种小鼠分为2个亚组,分别为对照组与他汀干预组(Ator组),HSP22~(-/-)组(KO组)与HSP22~(-/-)他汀干预组(KO+Ator组)及HSP22~+组(Tg组)与HSP22~+他汀干预组(Tg+Ator组),各干预组从第5周开始给予Ator(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))干预,各对照组给予等量生理盐水,共饲养13周。采用油红O及苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察AS病变程度,免疫组化法、Western blot法和ELISA法检测主动脉和血清中HSP22、NF-κB、eNOS、ICAM-1及IL-6的表达。结果:油红O及HE染色示Tg组主动脉斑块相对面积低于KO组(P0.05)。KO组的血清和主动脉中HSP22的蛋白表达显著低于对照组和Tg组,对照组显著低于Tg组。Tg组及对照组的主动脉eNOS蛋白的表达显著高于KO组。对照组的主动脉NF-κB及ICAM-1蛋白表达较KO组显著降低,较Tg组显著升高。对照组、KO组及Tg组血清IL-6水平的差异无统计学显著性。结论:HSP22基因缺失可上调NF-κB和ICAM-1的表达,降低eNOS的表达,加速AS的进展;HSP22基因过表达可降低NF-κB和ICAM-1的表达,从而改善AS。HSP22基因缺失部分限制了他汀下调NF-κB和ICAM-1及上调eNOS表达的作用;其过表达可促进他汀下调ICAM-1表达,进一步改善AS。     

Continuous fever-range heat stress induces thermotolerance in odontoblast-leneage cells

Objective

Heat shock during restorative procedures can trigger damage to the pulpodentin complex. While severe heat shock has toxic effects, fever-range heat stress exerts beneficial effects on several cells and tissues. In this study, we examined whether continuous fever-range heat stress (CFHS) has beneficial effects on thermotolerance in the rat clonal dental pulp cell line with odontoblastic properties, KN-3.

Methods

KN-3 cells were cultured at 41 °C for various periods, and the expression level of several proteins was assessed by Western blot analysis. After pre-heat-treatment at 41 °C for various periods, KN-3 cells were exposed to lethal severe heat shock (LSHS) at 49 °C for 10 min, and cell viability was examined using the MTS assay. Additionally, the expression level of odontoblast differentiation makers in surviving cells was examined by Western blot analysis.

Results

CFHS increased the expression levels of several heat shock proteins (HSPs) in KN-3 cells, and induced transient cell cycle arrest. KN-3 cells, not pre-heated or exposed to CFHS for 1 or 3 h, died after exposure to LSHS. In contrast, KN-3 cells exposed to CFHS for 12 h were transiently lower on day 1, but increased on day 3 after LSHS. The surviving cells expressed odontoblast differentiation markers, dentine sialoprotein and dentine matrix protein-1. These results suggest that CFHS for 12 h improves tolerance to LSHS by inducing HSPs expression and cell cycle arrest in KN-3 cells.

Conclusions

The appropriate pretreatment with continuous fever-range heat stress can provide protection against lethal heat shock in KN-3 cells.     

丹参多酚酸盐对持续性＋Gz 环境下大鼠牙髓的影响

目的：探讨丹参多酚酸盐（DSSM）对高正加速度（＋Gz）重复作用下的大鼠磨牙牙髓的作用。方法：27只 SD 雄性大鼠用随机区组法分为9组,每组3只。阳性对照组和药物组分别在＋5 Gz、＋10 Gz 的条件下共离心30 s,每天重复5次,间隔以＋1Gz 持续60 s,4 d /周,共3周。实验期间药物组于每次离心前30 min 按剂量腹腔注射 DSSM溶液（低、中、高给药剂量分别为2、6、18 mg/kg）,阴性及阳性对照组注射等体积生理盐水。实验结束后,光镜下观察各组大鼠牙髓组织形态学变化情况,并采用 Real time qPCR 方法测定大鼠磨牙牙髓中热休克蛋白（HSP70）mRNA 相对含量表达的情况。结果：＋5 Gz 和＋10 Gz阳性对照组大鼠活动程度降低,磨牙牙髓中出现空泡性变,组间差异不明显。HSP70 mRNA 的相对含量比阴性对照组高（P ＜0．05）。药物组中 HSP70 mRNA 的相对表达量较各自阳性对照组降低,＋10 Gz 高剂量组有统计学意义（P ＜0．05）。结论：＋Gz可引起牙髓损伤,＋Gz 值的增加与 HSP70 mRNA 相对表达量增加相关,DSSM可能对牙髓有保护作用。     

Non-Invasive PET Imaging of EGFR Degradation Induced by a Heat Shock Protein 90 Inhibitor

Purpose The aim of this study is to non-invasively monitor the epidermal growth factor receptor (EGFR) response to a Hsp90 inhibitor–17-AAG treatment in a PC-3 prostate cancer model. Procedures Nude mice bearing PC-3 tumor were injected intraperitoneally with 17-AAG and then imaged with micro positron emission tomography (microPET) using ⁶⁴Cu-DOTA–cetuximab. Biodistribution studies, immunofluorescence staining, and Western blot were performed to validate the microPET results. Results PC-3 cells are sensitive to 17-AAG treatment in a dose-dependent manner. Quantitative microPET showed that ⁶⁴Cu-DOTA–cetuximab has prominent tumor activity accumulation in untreated tumors (14.6 ± 2.6%ID/g) but significantly lower uptake in 17-AAG-treated tumors (8.9 ± 1.6% ID/g) at 24 h post-injection. Both immunofluorescence staining and Western blot confirmed the significantly lower EGFR expression level in the tumor tissue upon 17-AAG treatment. Conclusions The early response to anti-Hsp90 therapy was successfully monitored by quantitative PET using ⁶⁴Cu-DOTA–cetuximab, which indicates that this approach may be valuable in monitoring the therapeutic response to Hsp90 inhibitor 17-AAG in EGFR-positive cancer patients.     

姜黄素对干热环境热射病大鼠肾损伤及细胞凋亡的影响

目的探讨姜黄素对干热环境热射病大鼠肾脏损伤的病理变化及细胞凋亡的影响。 方法SPF级成年健康雄性SD大鼠50只，在SPF级环境适应性饲养1周，按随机数字表法分为5组：常温对照组、干热对照组、姜黄素低浓度处理组(50 mg/kg)、姜黄素中浓度处理组(100 mg/kg)、姜黄素高浓度处理组(200 mg/kg)，每组10只。常温及干热对照组给予0.9%生理盐水灌胃，姜黄素组大鼠给予不同浓度姜黄素溶液灌胃，连续7 d。第8天除常温对照组外，其余4组大鼠均转移到模拟干热环境实验舱中。入舱实验的第150 min达到热射病状态，麻醉处死大鼠后留取尿液、肾组织进行分析，肾损伤分子-1(KIM-1)试剂盒检测尿液KIM-1水平变化，苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠肾组织病理形态变化，进行肾损伤病理学评分，细胞凋亡缺口末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡并计算凋亡率。 结果常温对照组尿液KIM-1水平、肾损伤病理学评分、肾组织细胞凋亡率分别为[(100.36±5.54)ng/L]、[(35.50±9.52)分]、[(0.55±0.04)%]；干热对照组大鼠各指标分别为[(1 060.57±75.50)ng/L]、[(710.67±74.60)分]、[(5.53±0.48)%]；姜黄素低浓度处理组各指标分别为[(945.73±48.07)ng/L]、[(701.67±64.84)分]、[(5.10±0.37)%]；姜黄素中浓度处理组各指标分别为[(639.17±44.71)ng/L]、[(365.00±34.06)分]、[(2.05±0.35)%]；姜黄素高浓度处理组各指标分别为[(592.67±34.29)ng/L]、[(289.00±35.08)分]、[(1.33±0.20)%]。各项指标水平在各组间比较，均差异有统计学意义(F＝373.70，203.16，289.81；均P<0.01)，干热对照组KIM-1水平和肾损伤病理学评分均明显高于常温对照组(t＝31.04，21.99；均P<0.01)。肾损伤病理学评分和肾组织细胞凋亡率在姜黄素低浓度组和干热对照组之间比较，均差异无统计学意义(t＝0.22，1.74；均P>0.05)，姜黄素中浓度处理组(t＝10.33，14.43)、高浓度处理组(t＝12.53，19.82)与干热对照组之间比较，均差异有统计学意义(均P<0.01)。 结论姜黄素预处理对干热环境热射病大鼠肾损伤具有一定的保护作用，可能通过阻断肾细胞凋亡通路发挥对肾脏损伤的保护作用。     

缺血预处理对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的探讨缺血预处理(IP)对硬化肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法Wistar雄性大鼠制成肝硬化模型。分两组:IP组离断肝周韧带,消除侧枝循环,用Pringle's法阻断肝门15min,然后恢复血供,关腹;C组只予以开、关腹。48 h后,再次Pringle's法阻断肝门30 min,恢复血供。用Western blotting法测IP后6、24、48 h肝组织中热休克蛋白70(HSP70)表达的水平;测再灌注1、3 h血清生化酶(ALT、AST、LDH)及再灌注3h肝组织中谷胱苷肽(GSH)水平;行病理学观察。结果IP后6 h,两组均有微量HSP70表达,至24-48hIP组HSP70表达显著增强,呈高水平;而C组中在各时点HSP70均无表达增强。再灌注1h,IP组的ALT、AST、LDH水平显著低于C组(P<0.01或P<0.05);再灌注3h,IP组的ALT、AST水平明显低于C组(P<0.01)而其肝组织中的GSH水平明显高于C组(P<0.05)。术后一周生存率IP组(93.10%)明显高于C组(73.33%)(P<0.05)。缺血再灌注后1、3h,IP组的肝细胞损伤明显轻于C组。结论在硬化大鼠肝脏中,IP启动内源性保护机制,诱导HSP70的大量表达,而HSP70通过增加或提高GSH的产生及其活性,清除自由基,减轻硬化肝脏缺血再灌注损伤。     

热打击联合脂多糖刺激对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响

目的：观察脂多糖（LPS）与热打击分别单独作用与联合作用对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响。方法：于37℃、5％CO2标准培养箱中培养人肠上皮细胞株SW480。实验分4组：空白对照组直接收集细胞上清;LPS单独刺激组（LPS组）分别使用0、0．01、0．1、1和10μg／ml的LPS刺激SW480细胞,24h后收集细胞上清;热打击组将SW480细胞进行热打击（42℃,1h）后在标准孵箱分别培养1h和24h后收集细胞上清;LPS＋热打击组将SW480细胞42℃热打击1h后给予上述浓度的LPS刺激,再重新置于标准孵箱中培养,24h后收集细胞上清。各组细胞上清用LiquiChip液相蛋白芯片系统分别检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、7干扰素（IFN-7）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等10种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平。结果：单独LPS刺激时呈剂量依赖性诱导SW480表达分泌IL-8,对其余9种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平影响不明显。单纯热打击仅诱导SW480细胞表达分泌IL-8的水平升高,且与空白对照组比较,仅热打击24h后IL-8的水平显著增加（P〈0．01）。热打击联合不同浓度的LPS刺激SW480细胞,LPS浓度低时并不影响SW480表达分泌IL-8的水平（P〉O．05）,而高浓度LPS可以显著减少其表达分泌水平（P〈0．05）。结论：人肠上皮细胞SW480作为脏器实质细胞,对炎性刺激仅能产生单一种类的细胞因子,其中LPS单独刺激和一定强度的热打击均可上调SW480分泌IL-8;但高浓度LPS在热环境下可抑制SW480细胞的IL-8表达分泌水平。